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本试剂盒针对非洲猪瘟P72外膜蛋白基因，探针携带FAM荧光标记基团。灵敏度为5copy。通常阳性标准质粒的Ct值在21~25左右。水对照和阴性猪DNA样品测试实验中，在35个循环条件下未见有明显扩增曲线。

试剂盒特点：

• 制品为冻干品形态，可常温储存、运输，长效保质期；
• 试剂盒搭配的热启动Fast Taq DNA聚合酶确保了极速扩增速度，30分钟内完成检测；
• 检测灵敏度稳定的达到5 Copy级别，提取的病料核酸样品可低至“飞克”级别，为拭子、水、环境等样本的检测提供了可靠的方案；
• 在确保高灵敏度的同时，极为严格的阴性控制水准，避免假阳性检出，并利于检测人员判读结果；
• 引物探针覆盖于非洲猪瘟保守外膜蛋白P72区域，避免变异病毒的漏检；
• 先进的LNA短引物技术，提供最为苛刻、严谨的引物探针组合，确保试剂盒的高可靠性。

试剂盒检测实例：


图1：高灵敏度检测能力，低至5 Copy,1-7分别为10⁵、10⁴、10³、10²、10、5 Copy、ddH2O


图2：猪瘟阳性病料（脾脏）提取的基因组DNA模板检测能力，低至“飞克”级,1-7分别为2ng、0.4ng、80pg、16pg、3.2pg、640fg、ddH2O


图3：阴性控制及低Copy区分能力，可靠的区分5和10 Copy,
1：10⁵Copy；
2：10 Copy（8重复）；
3：5 Copy（8重复）；
4：ddH2O（8重复）

试剂盒组成：

组分	规格
Lyophilized TaqMan PCR Reagent	1瓶
2×TaqMan PCR Buffer 5	1mL
ASFV TaqMan PCR Assay	1支
阳性标准品（105copy/μl）干粉	1支

保存条件：室温保存，有效期1年。

使用方法：

• TaqMan PCR Reagent为冻干品形式，内含热启动Fast Taq DNA聚合酶、dNTP等，在未溶解前，该制品可-20℃长期保存，并可室温运输，性能无下降。使用前每瓶用1ml的2×TaqMan PCR Buffer 5溶解后，可立即使用，剩余试剂可在-20℃保存1个月，在-60℃以下长期保存。
• ASFV TaqMan PCR Assay为干粉形式(含引物和探针)，该制品可-20℃长期保存，并可室温运输，性能无下降。使用前每瓶用750μl的ddH2O溶解后，可立即使用，剩余试剂可在-20℃保存1个月，在-60℃以下长期保存。
• 阳性标准品为干粉形式，首次使用前加入100μl的ddH2O，漩涡10s溶解后，保存于-20℃。溶解后的制品浓度为10⁵copy/μl，每次实验时采用2.5μl即可。
• 按照如下组分配制PCR反应体系：
  

  成分	用量
  溶解后的TaqMan PCR Reagent	10μL
  溶解后的ASFV TaqMan PCR Assay	7.5μL
  提取的核酸DNA样品	2.5μL

• 进行Real-Time PCR扩增（FAM信号），程序如下：
  

  Stage 1:	95℃	30s
  Stage 2:	95℃	5s	35循环
  	60℃	20s

• 结果判读
  实验成立条件
  (1)阳性标准品的扩增Ct<25
  (2)阴性水对照的扩增无Ct
  判定标准
  (1)阳性：检测样品扩增曲线明显，表明样品中含有病毒分子。
  (2)阴性：检测样品无Ct（平线），表明样品中不含有病毒分子。

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